八字算命,称骨算命,抽签算命,姓名算命,指纹算命

手相图解,眼皮跳测吉凶,痣相图解,宝宝起名

您所在位置 >首页 > 以多巴(L-DOPA)为底物
以多巴(L-DOPA)为底物

时间: 2025-08-19 19:56:56     来源: ioncap.chieffocus.com     作者: 历史典故

  

以多巴(L-DOPA)为底物,柚皮测定酪氨酸酶的苷氢活性。先将待测样品用无水乙醇溶解,抗氧配制成质量浓度为1Mg/ML的化活贮备液,再依次稀释成不同浓度的性研样品溶液。按表2所示,柚皮依次准确吸取不同浓度的苷氢样品溶液,pH6.8的抗氧0.5MoL/L磷酸盐缓冲溶液,0.5MMoL/LL-DOPA溶液和0.15Mg/ML酪氨酸酶溶液,化活充分混匀,性研在37℃水浴锅中孵育反应30MiN,柚皮然后立即测定各试管中反应溶液在475NM处的苷氢吸光值。上述试验均重复3次。抗氧根据酶反应活性的化活定义,在一定的性研抑制剂浓度下,酶反应活性表示为ACTi,在没有抑制剂时酶反应活性表示为ACT0,则受试样品对酶的相对抑制率(I)可以定义为:
 

式中,ACTi—有抑制剂时的酶反应活性;ACT0—没有抑制剂时的酶反应活性;A1,A2,A3,A4—1,2,3,4号反应液的吸光值。

1.2.7 B16黑色素瘤细胞细胞MTT试验

称取50g重铬酸钾固体,以100ML蒸馏水100℃溶解(电炉加热),快速加入900ML浓H2sO4,混匀,冷却即可使用。MTT用PBs配制成质量浓度5Mg/ML,过0.22μM水相滤膜后存于10ML无菌离心管中,于-20℃冷冻保存。具体步骤:

1)取柚皮苷、NariNgiNDC和熊果苷的标准品

20Mg,加入DMsO溶解配成500MMoL/L的母液,过0.22μM有机滤膜后以每管20μL分装于无菌的200μL离心管中,于-20℃冷冻保藏。

2)不同浓度样品的配制

分别取柚皮苷、NariNgiNDC和熊果苷3种物质500MMoL/L的母液各4μL,加入4ML1640基础培养基中,配成500μMoL/L的溶液,然后分别稀释到250,125,62.5μMoL/L3个浓度。

3)96孔细胞培养板培养细胞

在超净工作台中移取5ML75T细胞培养瓶终止消化后的细胞与培养液的混合液于离心管中,800r/MiN离心4MiN,弃上清液,移取3ML完全培养基于离心管并混匀细胞液,取上述1ML细胞液,加1ML完全培养基,取80μL于平板计数器计数,用完全培养基稀释调整细胞浓度为8000个细胞/100μL,用12通道移液枪将细胞液混匀,加入96孔细胞培养板,每孔加入100μL,做好标记后将细胞培养板放入CO2恒温培养箱培养24h。

4)96孔细胞培养板中加入样品

将上述96孔细胞培养板放入CO2恒温培养箱培养24h,用废液真空泵吸弃细胞培养液,每孔加入不同浓度的样品150μL,并且每块96孔板都要留1到2列只加基础培养基做空白对照,做好标记后将细胞培养板放入CO2恒温培养箱培养24h。

5)B16黑色素瘤细胞的MTT试验

在超净工作台中,取PBs配成质量浓度5Mg/ML的MTT溶液,与基础培养基以体积比1∶9的比例配成MTT细胞培养液。将步骤4)中加样品培养24h后的细胞培养液用废液真空泵吸弃,每孔加入150μLMTT细胞培养液,做好标记后将细胞培养板放入CO2恒温培养箱培养4h,吸弃MTT细胞培养液,每孔加入150μLDMsO,于酶标仪中振动10MiN后测定波长490NM处的吸光度值。

细胞存活率=(A0-Ax)/A0×100%

式中,A0—不加样品的空白吸光度值;Ax—加不同浓度样品作用后的吸光度值。

1.2.8 B16黑色素瘤细胞HoeChsT荧光染色试验

具体操作步骤:

1)于超净工作台上,打开六孔板,置灭菌盖玻片。将细胞悬液滴加至盖玻片上,置CO2体积分数为5%的培养箱中,37℃培养至细胞固着(约2h),加入2ML细胞培养液继续培养约6h。弃培养基,用PBs洗3次,每次5MiN。

2)用4%多聚甲醛固定30MiN,PBs洗3次,每次5MiN。

3)切片稍甩干后在圈内滴加适量HoeChsT染液到爬片上,室温避光孵育15MiN。

4)PBs漂洗爬片3次,每次5MiN,从六孔板内取出爬片,将有细胞的一面封到滴加有抗荧光淬灭封片剂的载玻片上,荧光显微镜下观察并拍照。

1.2.9 NariNgiNDC与双孢蘑菇酪氨酸酶的分子对接

采用CheMBioDrawULTra14.0画出化合物熊果苷和NariNgiNDC的结构,然后用CheMBio3DULTra14.0转化为三维结构,用MMFF94力场进行优化。双孢蘑菇酪氨酸酶的三维结构(PDBiD:2Y9X)从RCsB蛋白数据库下载。酪氨酸酶和化合物均使用AuTodoCkTooLs1.5.6转化为PDBQT格式。采用AuTodoCkviNa1.1.2进行分子对接。酪氨酸酶活性位点的坐标设置为:CeNTer_x=-10.044,CeNTer_y=-28.706,CeNTer_z=-43.443;size_x=15,size_y=15,size_z=15。为了增加计算的准确度,将参数exhausTiveNess设置为20。其它参数均用默认值。最后,选取打分值最高的构象用PyMoL1.7.6进行结果分析。

2 结果与讨论

2.1 柚皮苷、NaringinDC、NHDC及槲皮素对ABTS自由基的清除效果

以TroLox作为对照,以其浓度-吸光值绘制标准曲线y=0.3627x+0.0661(R2=0.9943),研究柚皮苷、NariNgiNDC、NHDC及槲皮素4种样品对ABTs自由基清除效果,结果见图3。4种样品对ABTs自由基清除效果以TroLox的抗氧化物质的量表示,结果见表3。

由表3可知,4种样品对ABTs自由基均有清除作用。以TroLox作为对照,4种样品的总抗氧化能力结果中,柚皮苷的TroLox抗氧化物质的量为0.1748MMoL/g,NHDC为2.9109MMoL/g,NariNgiNDC为0.6986MMoL/g,槲皮素为39.6103MMoL/g。4种样品对ABTs自由基清除能力依次为槲皮素>NHDC>NariNgiNDC>柚皮苷。

2.2 柚皮苷、NaringinDC、NHDC及槲皮素对羟自由基的清除效果

以TroLox为对照,以其浓度-吸光值绘制标准曲线y=4.0588x+0.079(R2=0.9998),研究柚皮苷、NariNgiNDC、NHDC及槲皮素4种样品对羟自由基清除效果,结果见图4。4种样品对羟自由基清除效果以TroLox的抗氧化物质的量表示,结果见表4。

由表4可看出,4种样品对羟自由基均有清除作用,试验中以TroLox作为对照,得到柚皮苷清除能力的TroLox物质的量为19.8μMoL/g,NariNgiNDC为31.9μMoL/g,NHDC为44.4μMoL/g,槲皮素为365.5μMoL/g。4种样品清除羟自由基能力依次为槲皮素>NHDC>NariNgiNDC>柚皮苷

声明:本文所用图片、文字来源《中国食品学报》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系

相关链接:柚皮苷槲皮素酪氨酸酶磷酸盐

《以多巴(L-DOPA)为底物》男孩、女孩宝宝名字推荐

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

  、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、

本站部份内容来源自网络,仅供网友阅读,勿做为商业目的。如果侵犯了原作者的权利请与管理员联系,我们会尽快删除。
文章推荐:
男孩起名大全女孩起名大全
热门文章推荐

友情链接

Air Jordan 4 35周年纪念:Nigel Sylvester联名款震撼发布碘溶液标准物质:高纯度分析校准基准,科研必备北京海淀开展移动“砝码”科普活动广州持续开展城中村电费加价专项整治北京市市场监管局召开电动自行车生产销售单位警示约谈会夹层玻璃的功能以及特点 汽车挡风玻璃是夹层玻璃,行业资讯adidas Adizero Select 2.0 篮球鞋正式登场 杰伦·格林上脚菌种强化结合工艺优化提高酱香白酒基酒中四甲基吡嗪含量的研究(一)菌种强化结合工艺优化提高酱香白酒基酒中四甲基吡嗪含量的研究(一)Nike SB Dunk Low新款爆出 麂皮与麻绳材质结合呈现粗矿美感玻璃幕墙的厚度要求 玻璃幕墙验收标准,行业资讯男人吸烟对备孕的不良影响及必知重要信息:专家分享备孕小贴士妊娠期糖尿病饮食指南,健康宝宝从饮食开始夏枯草水提物对黑腹果蝇寿命的影响(二)光动力学疗法在感染性疾病中的应用(三)煮茶器怎么用 玻璃茶壶的优点,行业资讯11月上旬玻璃行业各厂家去库存成果显著,行业资讯粳稻品质特性指标差异性分析研究(一)怎么割玻璃上的圆孔 玻璃切割片的特性,行业资讯漂白剂的测定(一 )原创:蒽醌类化合物的介绍——以常用中药大黄为代表通电玻璃的详细规格 调光玻璃好不好用,行业资讯玻璃仪器的磨口规格 玻璃仪器的存放方法,行业资讯玻璃幕墙构成部件 玻璃幕墙的表面该怎么维护,行业资讯食品控释抗菌包装膜的控释机理研究进展(二)高效液相色谱法测定多类食品中胭脂虫红的含量(一)备孕中戒烟:给宝宝一个健康的未来如何用玻璃刀切割 玻璃切割技巧,行业资讯备孕喝点豆浆好吗男性点支撑式玻璃幕墙的结构 点支撑玻璃幕墙构成部件,行业资讯俄罗斯松针油与加拿大冷杉针油挥发性成分比较与分析(一)钢化玻璃是否应该具有3C认证标志 钢化玻璃厂没3c证打3c违法吗,行业资讯华安:福建东晶玻璃试投产,行业资讯高效液相色谱法同时测定银杏叶及其提取物中4种游离黄酮含量(一)食品添加剂对猫眼豆黄酮类化合物抗氧化活性的影响(一)低辐射玻璃的特性 低辐射镀膜玻璃的种类,行业资讯